一、 目的

规范高效精东视频APP下载入口的操作、使用和维护，确保分析结果的准确性、重现性和仪器安全稳定运行，延长仪器使用寿命。

二、 适用范围

适用于所有使用本实验室高效精东视频APP下载入口进行分析检测的人员。

三、 安全注意事项

个人防护：操作时必须穿戴实验服、手套和防护眼镜。

溶剂安全：

了解所用流动相（甲醇、乙腈、缓冲盐等）的毒性和易燃性，在通风橱内进行操作。

废弃流动相和样品需按规定分类收集，妥善处理。

压力安全：

系统高压力不得超过泵和色谱柱的耐压极限。

在开启泵前，确保流路畅通，排空阀已拧紧，避免压力急剧升高。

用电安全：仪器应接地良好，防止溶剂泄漏到电路部分。

色谱柱保护：使用符合要求的流动相和样品，防止色谱柱堵塞或化学损坏。

四、 关键注意事项

流动相“三必须”：

必须使用色谱纯溶剂和超纯水。

必须经过 0.45 µm或0.22 µm滤膜过滤。

必须进行超声脱气，防止气泡进入系统。

缓冲盐“三忌”：

忌存不冲：实验结束必须用高比例水相（≥10%）冲洗≥30分钟，彻底置换盐分，再转换到有机相保存。

忌现配不用：必须现用现配，防止长菌变质。

忌沉淀：严禁将高浓度缓冲盐与高比例有机相直接混合，防止结晶析出。

色谱柱“三核心”：

方向：确保流动相流向与柱体箭头方向一致，严禁反接。

保存：长期不用时，必须用纯有机相（如甲醇、乙腈）冲洗并保存在其中。

兼容：确保流动相pH值、溶剂与色谱柱固定相兼容，不超出使用范围。

样品“两匹配”：

样品溶剂强度应与初始流动相匹配或更弱，以防峰形畸变。

样品必须清澈透明，建议过滤后进样。

关机“一绝对”：

绝对禁止在含缓冲盐的流动相中直接关机，必须执行“水相过渡”冲洗流程。

五、 操作流程

（一） 开机前准备

环境检查：检查实验室温度（一般15-30℃）和湿度是否稳定。

流动相准备：过滤、脱气。缓冲盐现用现配。

样品准备：完全溶解，并用与流动相初始组成相近的溶剂稀释、过膜。

仪器检查：检查废液瓶容量、管路漏液和色谱柱连接。

（二） 开机与系统初始化

依次打开稳压电源、电脑、检测器、自动进样器、柱温箱，后打开输液泵。

启动工作站，等待系统自检就绪。

（三） 方法编辑与参数设置

在工作站中设置：

泵：流动相比例、流速、压力上下限。

检测器：检测波长、采样频率。

柱温箱：温度。

自动进样器：进样体积、洗针程序。

运行时间。

（四） 系统平衡

Purge：打开排空阀，对各通道进行Purge，排除气泡后拧紧排空阀。

平衡：以方法初始条件运行，直至基线平稳、压力稳定。

（五） 样品分析

放置样品，编辑序列。

保存并运行序列，实时监控基线和压力。

（六） 数据处理与报告

进行积分、校准、计算并生成报告。

（七） 关机

冲洗：

若有缓冲盐：先用超纯水冲洗≥30分钟，再用甲醇/乙腈冲洗≥30分钟。

若无缓冲盐：直接用甲醇/乙腈冲洗≥15分钟。

停机：流速降为0，在软件中关闭各模块，依次关闭硬件电源。

登记：填写仪器使用记录。

六、 日常维护

泵：定期检查并更换泵密封圈。

进样器：定期清洗或更换进样针、转子密封垫。

检测器：定期更换氘灯。

色谱柱：充分冲洗后妥善保存。

七、 常见问题与排查

问1：系统压力异常偏高可能是什么原因？如何处理？

答：常见原因是堵塞。

处理：首先排查并更换或清洗保护柱。若无效，可能色谱柱或在线过滤器堵塞，需进行反冲（若允许）或更换。若使用了缓冲盐，考虑是否为盐析，用高比例水相低速冲洗。

问2：系统压力过低或剧烈波动怎么办？

答：通常由气泡或漏液引起。

处理：首先对所有流动相通道进行充分Purge排气。若压力仍不稳定，仔细检查所有管路接头（特别是泵头和进样器）是否有漏液，并拧紧或更换部件。

问3：基线噪音很大可能是什么问题？

答：可能原因有三类。

处理：

检查氘灯：若使用时间超过2000小时，考虑更换。

检查流动相：重新配制新鲜流动相并脱气。

检查气泡：通过Purge和提高流速冲走检测器中的气泡。

问4：色谱峰出现拖尾或分叉如何排查？

答：主要与色谱柱和样品有关。

处理：

检查色谱柱：使用柱效测试标准品判断柱效是否下降，必要时冲洗再生或更换色谱柱。

检查样品溶剂：确保样品溶剂强度不高于初始流动相。

检查连接：确认色谱柱两端管路连接紧密，无死体积。

问5：分析过程中出现“鬼峰”怎么办？

答：鬼峰通常来自污染。

处理：

进行空白运行：不进样采集数据，若仍有鬼峰，则污染来自系统或流动相。

清洗系统：用强溶剂冲洗整个流路。

更换流动相：使用新鲜配制的流动相。

加强洗针：增加自动进样器的洗针次数和强度，防止交叉污染。