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1.1 前言
1.1.1 米诺地尔性质
米诺地尔是一种钾通道开放药，这类药物在降压时常伴有发射性心动过速和心输出量的增加。对于血管扩张的作用具有选择性，见于冠状动脉，胃肠道血管和脑血管，而不扩张肾和皮肤血管，它还可以减低或停止掉发并且促进毛发再生。
1.1.2 米诺地尔结构
图1-1米诺地尔结构式
1.1.3 米诺地尔危害
米诺地尔可用于治疗脱发，目前的研究认为米诺地尔可以直接刺激毛囊上皮细胞增殖和分化；促进血管形成，增加局部血流量；开放钾离子通道；使毛囊由休止期向生长期转化。米诺地尔高浓度比低浓度疗效好，但其引起的局部不良反应也较多，过量的米诺地尔会导致多毛症，具有潜在危害，因此需要对洗发类样品中的米诺地尔进行检测。
1.1.4 检测方法
大连精东黄色视频分析仪器有限公司，结合GB/T 35837-2018《化妆品中禁用物质米诺地尔的测定 高效液相色谱法》提出了针对育发生发功效的乳液、膏霜、水剂和洗发类样品中米诺地尔分析的全套解决方案。相关人员可参考本实验中的方法，进行洗发用品中米诺地尔的检测。
1.2 仪器设备与试剂
表1-1(a) EClassical 3100型高效液相色谱系统设备标准配置清单
|
序号 |
名称 |
数量 |
订货号 |
|
1 |
UV3100紫外-可见检测器 |
1台 |
31020023 |
|
2 |
P3100高压恒流泵 |
1台 |
31010047 |
|
3 |
O3100色谱柱恒温箱 |
1台 |
31040010 |
|
4 |
Rheodyne 7725i高压六通进样阀 |
1个 |
32027725i |
|
5 |
ZJ-1阀支架 |
1个 |
18050004 |
|
6 |
Chromsoft色谱数据工作站 |
1套 |
|
|
7 |
TD-1-15梯度混合器(选配) |
1个 |
31060001 |
|
8 |
TP3100溶剂托盘 |
1台 |
|
|
9 |
Supersil ODS2 5µm 4.6×250mm色谱柱 |
1支 |
|
|
10 |
1台 |
31090005 |
|
|
11 |
DG3100在线脱气机(选配) |
1台 |
31050006 |
表1-1(b) iChrom 5100型高效液相色谱系统设备标准配置清单
|
序号 |
名称 |
数量 |
订货号 |
|
1 |
D5101紫外-可见检测器 |
1台 |
31020022 |
|
2 |
P5101高压恒流泵 |
1台 |
31010041 |
|
3 |
O5100色谱柱恒温箱 |
1台 |
31040009 |
|
4 |
Rheodyne 7725i高压六通进样阀 |
1个 |
32027725i |
|
5 |
VB5101阀支架 |
1个 |
18050012 |
|
6 |
Chromsoft色谱数据工作站 |
1套 |
|
|
7 |
M5101系统组织器 |
1台 |
31080009 |
|
8 |
Supersil ODS2 5µm 4.6×250mm色谱柱 |
1支 |
|
|
9 |
1套 |
|
|
|
10 |
S5101自动进样器(选配) |
1台 |
31090004 |
|
11 |
P5102高压恒流泵(选配) |
|
|
|
12 |
M5102系统组织器(选配) |
1台 |
31080010 |
表1-2 主要化学试剂、标准品清单
|
序号 |
试剂 |
纯度 |
|
1 |
甲醇 |
色谱纯 |
|
2 |
氯化钠 |
分析纯 |
|
3 |
去离子水 |
18.2MΩ |
|
4 |
米诺地尔标准品 |
阿拉丁 |
表1-3 主要样品前处理设备
|
序号 |
名称 |
规格型号 |
备注 |
|
1 |
溶剂过滤器 |
1000mL |
流动相过滤 |
|
2 |
隔膜真空泵 |
0.08MPa,160W |
流动相过滤，GM-0.33A |
|
3 |
超声清洗器 |
3L/6L, 40/60KHz, 120W |
流动相脱气，AS3120 |
|
4 |
精密电子天平 |
感量为万分之一 |
称量 |
|
5 |
离心机 |
3K-15 |
SIGMA |
实验过程中其它玻璃器皿还包括容量瓶(100mL、50mL、25mL、10mL)、移液枪(0～1000µL，0～5000µL)、移液枪枪头(1mL，5mL)、一次性PVC手套、一次性口罩、进样针、滤膜等若干。
1.3 实验方法
1.3.1 标准溶液配制
米诺地尔标准储备液(100mg/L)：准确称取10mg(精确至0.0001g)米诺地尔，用70%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，于4℃保存。
米诺地尔标准工作液：使用70%甲醇配制浓度分别为0.5mg/L、1.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L的米诺地尔标准工作液。
1.3.2 样品前处理
称取0.5g试样(精确至0.0001g)置于50mL离心管，加入70%甲醇10mL，摇匀，超声提取20min，5000r/min离心15min后，上清液经0.45µm微孔滤膜过滤，备用。
1.3.3 色谱条件
流动相：甲醇:0.3%三氟乙酸水溶液=45:55(V:V)
色谱柱：Supersil ODS2 5µm 4.6×250mm
流速：1.0 mL/min
波长：230nm
进样量：10µL
温度：30℃
1.4 实验结果
1.4.1 典型分离色谱图
进样分析浓度为20.0mg/L米诺地尔标准工作液，使用1.3.3中的色谱条件，结果如下图所示。
图1-2 米诺地尔标准溶液色谱图
表1-4 色谱参数
|
物质 |
保留时间(min) |
峰面积(mV.sec) |
不对称度 |
塔板数(N/m) |
|
米诺地尔 |
6.26 |
1359.99 |
1.13 |
38100 |
从以上结果可知，米诺地尔分析速度快，不对称度好，柱效高，故该方法适合于米诺地尔的分析。
1.4.2 线性与检出限
将米诺地尔标准工作溶液，按1.3.3中色谱条件进行分析，米诺地尔的线性如下表所示。
表1-5 线性方程
|
物质 |
线性方程 |
线性相关系数R |
|
米诺地尔 |
y = 67.8177x + 2.1842 |
0.9998 |
从上表可知，米诺地尔浓度在0.5mg/L到20mg/L线性范围内线性相关系数大于0.999。
以3倍信噪比对应的浓度换算为仪器的检出限，以10倍信噪比对应的浓度为仪器的定量限，检出限结果如下表所示。
表1-6 检出限对比
|
|
方法定量限(mg/kg) |
GB/T 35837-2018检出限(mg/kg) |
GB/T 35837-2018定量限(mg/kg) |
|
|
米诺地尔 |
0.26 |
0.86 |
5.00 |
10.00 |
从以上结果可知，本系统的米诺地尔检测的灵敏度明显低于国标中的要求，即符合检测要求。
1.4.3 方法准确性与重复性
在添加浓度0.5mg/L、5.0mg/L、20.0mg/L浓度范围内，测得回收率88.4%～102.7%，相对标准偏差为0.9%～4.3%。
表1-7 洗发水中米诺地尔方法准确性与重复性结果
|
加标浓度（mg/L） |
平行样品 |
实测值（mg/L） |
加标回收率（%） |
重复性（RSD%） |
|
0.5 |
1 |
0.49 |
99.7 |
1.8 |
|
2 |
0.49 |
99.4 |
||
|
3 |
0.51 |
102.7 |
||
|
5.0 |
1 |
4.82 |
96.4 |
4.3 |
|
2 |
4.61 |
92.3 |
||
|
3 |
4.42 |
88.4 |
||
|
20.0 |
1 |
18.49 |
92.4 |
0.9 |
|
2 |
18.18 |
90.9 |
||
|
3 |
18.40 |
91.9 |
1.4.4 实际样品
市场购买洗发水，按本文中提到的方法并进行了分析，结果如下所示。
图1-3 实际样品谱图
表1-8 实际样品
|
苯甲酸 |
浓度(μg/L) |
含量(μg/kg) |
|
洗发水 |
未检出 |
未检出 |
1.5 参考文献
[1]GB/T 35837-2018《化妆品中禁用物质米诺地尔的测定高效液相色谱法》。
周一至周日 8:30-17:30
（仅收市话费）
